1.重要的洗滌：

　　如果洗滌不充分，會造成一系列的差異和高背景zui后導致實驗結果偏差大。如果未結合的材料殘留在微孔板中，那么它會增加背景噪音。條件允許的情況下，適當增加洗滌液中的鹽濃度，這會阻止非特異結合反應。如果背景過高，懷疑洗滌不夠時，可以嘗試增加洗滌次數。

　　2.關鍵的封閉：

　　封閉液的作用是讓不相關的蛋白占據微孔板中潛在的結合位點。這就降低了可產生信號的抗體非特異結合的機會。如果背景過高，懷疑封閉不充分，那么可以嘗試使用更高濃度的封閉液，或適當延長封閉時間。

　　目前主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。使用的類型須取決于多個因素，包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、抗體和檢測試劑。好的封閉液應降低非特異性結合，但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發生相互作用。

　　3.抗體濃度須優化：

　　如果試劑稍有不同，則可能需要優化抗體的量。非特異的抗體結合會增加背景。為了防止這一點，切勿使用過多的一抗或二抗。

　　第四、檢測試劑要適量：

　　一定不可以使用過多的檢測試劑。如果濃度過高，或者未正確稀釋，則會導致高背景。也不要顯色過度，如有必要，優化一下何時應加入終止液。