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Hoechst33258染色液(1mg/ml)操作步驟
點擊次數:2458 更新時間:2018-01-23

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中文名:Hoechst33258染色液(1mg/ml)

供應商:上海遠慕

規格:1ml

分類:細胞染色

保存:—20℃,避光,12個月

用途:細胞凋亡檢測,普通細胞核染色,常規的DNA染色。

說明:Hoechst33258染色中leagene公司推薦采用該試劑;Hoechst33258是一種熒光染料,可以穿透細胞膜的藍色熒光染料,對細胞的毒性較低;染色染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測,可直接用于固定細胞或組織的細胞核染色,也可直接用于活細胞或組織的細胞核染色。

Hoechst33258染色液(1mg/ml)操作步驟

Hoechst33258染色液(1mg/ml)

 

Hoechst33258染色液(1mg/ml)操作步驟

1、固定的組織細胞染色

a.對于細胞或組織樣品,固定后,適當洗滌去除固定劑;隨后如果需要進行免疫熒光染色,則先進行免疫熒光染色,染色完畢后再按后續步驟進行Hoechst33258染色;如果不需要進行其它染色,則直接進行后續的Hoechst33258染色。

b.對于貼壁細胞或組織切片,加入少量Hoechst 33258工作液,覆蓋住樣品即可;對于懸浮細胞,至少加入待染色樣品3倍體積的工作液,混勻;室溫放置3-5分鐘。

c.吸除Hoechst33258染色液,用TBST,PBS或生理鹽水洗滌2-3次,每次3-5分鐘。

d直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察;細胞發生凋亡時,會看到凋亡細胞的細胞核呈致密濃染,或呈碎塊狀致密濃染。

2、活細胞染色

a.根據實驗具體要求,用無菌去離子水稀釋到自己所需濃度,即為Hoechst33258染色工作液;細胞核染色時,一般推薦工作濃度為1~5μg/ml。

b.取96,24,6孔板培養細胞至合適狀態;按96孔板加入100μl,24孔板加入500μl,6孔板加入1ml的比例,加入適當的Hoechst33258染色液,染液必須充分覆蓋細胞。

c.在適宜于細胞培養的條件下培養。

d,輕輕吸除Hoechst33258染色液。

e.用無菌的PBS或生理鹽水清洗2~3次。

f.進行熒光檢測。

 

Hoechst33258染色液(1mg/ml)注意事項:

1、Leagene Hoechst33258染色液(1mg/ml)應稀釋至合適的濃度后使用。

2、熒光染料都存在淬滅的問題,為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光衰減封片劑;建議染色后盡量當天完成檢測,活細胞或組織染色后應立即觀察。

3、避免反復凍融,否則容易失效。

4、Hoechst33258對人體有一定刺激性,請注意適當防護。

5、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

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標簽:Hoechst33258染色液(1mg/ml)

 

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